Pfeiffer人彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤B淋巴細(xì)胞

細(xì)胞用途：僅供科研使用。               

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

Pfeiffer人彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤B淋巴細(xì)胞

注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2.先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)（4h左右），穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。

3.靜置后鏡檢，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長情況。

4.  懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞瓶內(nèi)液體都轉(zhuǎn)移至無菌離心管內(nèi)，1000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5min，培養(yǎng)基上清可備用，管底細(xì)胞沉淀用培養(yǎng)基重懸。鏡檢時(shí)若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)培養(yǎng)；若密度未超過80%，細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，待達(dá)到80%時(shí)再正常傳代。備注：聚團(tuán)生長慢，有密度依賴，必須使用T25培養(yǎng)瓶豎立培養(yǎng)，3天一次半量換液一次，1-2周傳代一次。

貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。備注：細(xì)胞貼壁慢，傳代后細(xì)胞放2天不動(dòng)。

5.細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基，一半用客戶自備的培養(yǎng)基，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長狀態(tài)不佳。

6.因?yàn)榕囵B(yǎng)過程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過一周的細(xì)胞我們會酌情處理，但不提供免費(fèi)更換服務(wù)。 

相關(guān)推薦:

Gibco 12657-029胎牛血清500ML  2016  推薦(熱賣)
Gibco30044-033 ES級別胎牛血清500ML  
Gibco 12664025間充質(zhì)干細(xì)胞胎牛血清500ML 5586
Gibco 16250078超低IgG胎牛血清500ML 6140
Gibco10099-141優(yōu)級胎牛血清500ML 5168
Gibco16000-044特級胎牛血清(美國源)500ML
Gibco C2027050烏拉圭胎牛血清500ML 2016 南美 更高性價(jià)比胎牛血清，適合一般細(xì)胞的培養(yǎng) 
Gibco 12676-029熱滅活活性炭處理的胎牛血清500ML 8000
Gibco10100-147熱滅活胎牛血清500ML 6321
Gibco 16141-079胚胎干細(xì)胞胎牛血清500ML 5880
Hyclone南美普通胎牛血清Sv30087.01100ML  396
Hyclone南美普通胎牛血清Sv30087.02500ML 1680 推薦(熱賣)常年備庫存!!
HycloneSH30070.03E胚胎干細(xì)胞胎牛血清500ML
Hyclone SH30070.03 特級胎牛血清500ML
Hyclone 加拿大優(yōu)等SH30396.03胎牛血清500ML
Hyclone SH30079.03 透析性胎牛血清500ML
Hyclone活性炭/葡聚糖處理胎牛血清SH30068.03500ML
Hyclone SH30084.03澳洲優(yōu)等胎牛血清500ML 3179
Hyclone SH30084.03IR優(yōu)等澳大利亞胎牛血清|照射胎牛血清 500ML 3399
Hyclone SH30084.03IH澳大利亞優(yōu)級3x100nm過濾 輻射和熱滅活胎牛血清 500ML 3476
Hyclone SH30084.03HI 澳大利亞優(yōu)級3x100nm過濾 輻射和熱滅活胎牛血清 500ML3256
Hyclone SH30070.03T 四環(huán)素篩選特級胎牛血清500ML 
Hyclone SH30414.03 新西蘭補(bǔ)鐵小牛血清1000ML 990
Hyclone SH30541.03 促生長型牛血清
PAA15-101普通胎牛血清500ML 3150
PAA15-151優(yōu)級胎牛血清500ML 4750
clontech 631101四環(huán)素胎牛血清500ML 4705
clontech 631158ES級別胎牛血清500ML 4705
Biochrom S0113/S0613特級胎牛血清100ML 800
Biochrom S0115/S0615特級胎牛血清500ML 2900
Biochrom S3113活性炭過濾胎牛血清100ML 1900
Biochrom S3115 活性炭過濾胎牛血清500ML 6750
Biochrom 胚胎干細(xì)胞胎牛血清100ML 1200
Biochrom 胚胎干細(xì)胞胎牛血清500ML 4500